2013初級(jí)藥師考試輔導(dǎo)：丙型肝炎病毒的微生物學(xué)診斷

　　一、放射免疫診斷(RIA)或酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清中抗HCV

　　1989年，Kuo等建立了抗-C-100放射免疫試驗(yàn)方法(RIA)，隨后Ortho公司又研制成功酶聯(lián)免疫試驗(yàn)方法(ELISA)檢測(cè)抗-C-100.這兩種方法均用重組酵母表達(dá)的病毒抗原(C-100-3，為NS4編碼的蛋白，含363個(gè)氨基酸)，經(jīng)純化后包被微量塑料板孔，然后加被檢血清，該病毒抗原即與被檢血清中抗-C-100結(jié)合，最后加同位素或酶標(biāo)記的鼠抗人lgG單克隆抗體，加底物顯色判斷結(jié)果。

　　用上述酶聯(lián)免疫試驗(yàn)法(ELISA)檢測(cè)抗-C-100有如下缺點(diǎn)：

　　1. 抗-C-100出現(xiàn)較晚，約半數(shù)輸血后丙型肝炎病人于輸血后4～6個(gè)月抗―C-100首次陽(yáng)轉(zhuǎn)，因此，不宜作為急性丙型肝炎的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室診斷;

　　2.抗-C-100不是中和抗體，也不是lgM抗體，而是lgG抗體;

　　3.本法不夠靈敏，少數(shù)丙型肝炎病人檢測(cè)不到抗-C-100;

　　4.有非特異性，一些自家免疫性慢性肝病患者可出現(xiàn)假陽(yáng)性，因此，抗HCV陽(yáng)性需作重組免疫印跡試驗(yàn)(Recombinant Immune BlotAssay，RIBA，或稱 Western Blot)證實(shí)。

　　由于HCV核心抗體出現(xiàn)較早，因此，最近美國(guó)第二代酶聯(lián)免疫試驗(yàn)法(ELISA)檢測(cè)抗HCV.該試劑盒采用HCVC區(qū)編碼蛋白C-22-3和非結(jié)構(gòu)區(qū)NS3編碼蛋白C-33-3和C-100-3包被載體。用本法檢測(cè)抗HCV，其檢出率可提高25～30%，且檢出抗HDV的時(shí)間也可提早16～42天。

　　二、HDV cDNA/聚合酶鏈反應(yīng)(HCV cDNA/Polymerase Chain Reaction，RTPCR)測(cè)定肝和血清中HCV RNA.

　　本法是將HDV RNA逆轉(zhuǎn)錄為HCV DNA，選用高度保守的5′非編碼區(qū)引物擴(kuò)增放大后作電泳觀察結(jié)果。本法較靈敏。由于肝和血清中HCv RNA出現(xiàn)較抗-HCV為早，一些HCV感染者抗HCV尚未陽(yáng)轉(zhuǎn)時(shí)，其肝和血清中已可測(cè)到HDv RNA.HCV RNA陽(yáng)性，說(shuō)明病毒在體內(nèi)復(fù)制;HCV RNA陰轉(zhuǎn)，說(shuō)明病毒被清除。因此，RT-PCR可作為丙型肝炎的早期診斷和獻(xiàn)血員篩查的出現(xiàn)指標(biāo)，也可作為丙型肝炎預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)。

　　三、免疫組化法檢測(cè)肝組織中HCV抗原

　　感染HCV的黑猩猩或病人血清中提取lgG，用間接免疫熒光或間接免疫酶組化法檢測(cè)肝內(nèi)HCV抗原。