2015年自考生物制藥學(xué)復(fù)習(xí)資料:支原體污染的檢測(cè)方法
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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，支原體污染的檢測(cè)方法包括
(1)培養(yǎng)法：將疑有支原體污染的培養(yǎng)物0.5mL經(jīng)-20℃凍融后接種到支原體瓊脂平皿上，于37℃無(wú)氧條件下培養(yǎng)7～4d，觀察有無(wú)支原體菌落形成;
(2)熒光染色法：熒光染料用Hoechst33258，支原體內(nèi)含有DNA，通過(guò)支原體DNA結(jié)合熒光染料后，在熒光顯微鏡下能見(jiàn)到發(fā)綠色熒光的小亮點(diǎn)。被支原體污染的細(xì)胞不僅在細(xì)胞核而且在細(xì)胞核外及細(xì)胞膜上均顯示熒光;
(3)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法：是一種快速敏感的支原體檢測(cè)方法。根據(jù)常規(guī)PCR反應(yīng)原理和實(shí)驗(yàn)步驟即可完成對(duì)培養(yǎng)物中支原體的快速檢測(cè)，具有很高的靈敏度。可快速檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物和生物制品、牛血清等生物材料中的支原體污染，比常規(guī)培養(yǎng)法和DNA間接熒光染色法快5～10d。
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