2013年初級(jí)檢驗(yàn)技師考試：HLA血清學(xué)定型試驗(yàn)

    點(diǎn)擊進(jìn)入：2013年檢驗(yàn)技師考試時(shí)間：5月18、19、25、26

　　HLA-A、B、C、DR或DQ位點(diǎn)的抗原可用血清方法進(jìn)行檢測(cè)，所以稱為SD抗原(serologicallydefinedantigen)，其檢測(cè)方法目前普遍采用補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒(complementdependentcytotoxicyty，CDC)試驗(yàn)。

　　1.試驗(yàn)方法美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院(NIH)的標(biāo)準(zhǔn)方法如下：將一系列已知特異性的標(biāo)準(zhǔn)分型血清(1μl/孔)按設(shè)計(jì)好的方案加到72孔或60孔專用反應(yīng)板中(如暫時(shí)不用可以冰凍保存);加入待檢淋巴細(xì)胞2000個(gè)/1μl/孔，置室溫30min讓抗體與抗原結(jié)合;加入補(bǔ)體(多為家兔混合血清)5μl，置室溫60min;每孔加入5%伊紅2～3μl，使死細(xì)胞著色;3～5min后每孔加12%福爾馬林8μl固定細(xì)胞;待細(xì)胞全部沉淀后用相差顯微鏡或倒置顯微鏡觀察結(jié)果。某孔的著色細(xì)胞超過(guò)50個(gè)即為陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明被檢細(xì)胞的HLA型與該孔所加抗體的相一致;否則為不一致。

　　2.細(xì)胞分離檢測(cè)活體可取外周血直接分離;檢測(cè)尸體時(shí)取淋巴結(jié)，制成單個(gè)細(xì)胞并洗滌后再分離。檢測(cè)HLAⅠ類抗原時(shí)取單個(gè)核細(xì)胞層的細(xì)胞即可應(yīng)用，因?yàn)樵搶蛹?xì)胞都表達(dá)Ⅰ類抗原;但檢測(cè)HLA-DR和DQ等Ⅱ類抗原時(shí)，就需要進(jìn)一步分離較純的B細(xì)胞(純度達(dá)80%以上)，因?yàn)棰蝾惪乖环植荚赥細(xì)胞上。

　　3.分型血清試驗(yàn)用的標(biāo)準(zhǔn)抗血清必須從經(jīng)產(chǎn)婦(尤其多產(chǎn)婦)的血清中篩選，胎盤液或其他體液也可應(yīng)用;也可通過(guò)人工免疫獻(xiàn)血員的方法得到。篩選的方法也用CDC試驗(yàn)，只是將已知與待檢互換。Ⅱ類抗血清篩選后還必須用混合血小板將其中可能含有的Ⅰ類抗體吸收去，因試驗(yàn)用的B細(xì)胞上也有Ⅰ類抗原。許多人嘗試過(guò)抗HLA的單克隆抗體，但是多不成功，因鼠源性抗體主要是針對(duì)人類的公共抗原而非某個(gè)體的HLA私有抗原;還有一個(gè)原因是鼠源性抗體多不能固定補(bǔ)體，不能用細(xì)胞毒方法進(jìn)行檢測(cè)。

　　4.HLA定型板某些專門實(shí)驗(yàn)室將HLA定型血清預(yù)先加到專用的反應(yīng)板上冰凍保存，可供自己或出售給他人使用，試驗(yàn)時(shí)只須加入待檢細(xì)胞及其它試劑即可。定型板中抗血清的種類要覆蓋本民族或本地區(qū)80%以上的抗原，其中高頻抗原每種抗血清3份以上，低頻抗原每種抗血清2份以上。定型血清板須經(jīng)幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可或有關(guān)部門核準(zhǔn)后才能銷售和使用;現(xiàn)在國(guó)內(nèi)所做的定型板多限于HLAⅠ類抗原的檢測(cè)。

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