2012檢驗主管技師血液檢驗：紅細胞酶缺陷的檢驗及其應(yīng)用

　　1.高鐵血紅蛋白還原試驗

　　(1)原理：在血液中加入亞硝酸鹽使紅細胞中的亞鐵血紅蛋白變成高鐵血紅蛋白，正常紅細胞的G-6-PD催化戊糖旁路使NADP(氧化型輔酶Ⅱ)變成NADPH(還原型輔酶Ⅱ)，其脫的氫通過亞甲藍試劑的遞氫作用而使高鐵血紅蛋白(Fe3+)還原成亞鐵血紅蛋白(Fe2+)，通過比色可觀察還原的多少。當(dāng)G-6-PD缺乏時，高鐵血紅蛋白還原率下降。

　　參考值 正常人高鐵血紅蛋白還原率大于75%(臍帶血≥77%)。

　　(2)臨床意義：G-6-PD缺乏時，高鐵血紅蛋白還原率下降。中間缺乏(雜合子)為31%～74%，嚴(yán)重缺乏(半合子或純合子)小于30%。

　　2.變性珠蛋白小體檢查

　　(1)原理：G-6-PD缺乏的病人血樣加入乙酰苯肼于37℃孵育2～4小時，用煌焦油藍染色觀察紅細胞中珠蛋白小體的生成情況，計算含5個及以上珠蛋白小體的紅細胞的百分率。

　　參考值 正常人含5個及以上珠蛋白小體的紅細胞一般小于30%。

　　(2)臨床意義：G-6-PD缺乏癥常高于45%，故可作為G-6-PD缺乏的篩檢試驗。但還原型谷胱甘肽缺乏癥也增高;不穩(wěn)定血紅蛋白病含小體的細胞百分率為75%～84%，HbH病和化學(xué)物質(zhì)中毒時也增高。

　　3.G-6-PD測定：包括熒光斑點試驗和G-6-PD活性檢測。

　　(1)原理：在G-6-PD和NADP+存在下，G-6-PD能使NADP+還原成NADPH，后者在紫外線照射下會發(fā)出熒光。NADPH的吸收峰在波長340nm處，可通過單位時間生成的NADPH的量來測定G-6-PD活性。

　　參考值 正常人有很強熒光。正常人酶活性為(4.97±1.43)U/gHb。

　　(2)臨床意義：G-6-PD缺陷者熒光很弱或無熒光;雜合子或某些G-6-PD變異者則可能有輕到中度熒光。G-6-PD缺乏者酶活性減少。

　　4.丙酮酸激酶測定：包括熒光斑點試驗和PK活性檢測。

　　(1)原理：在二磷酸腺昔(ADP)存在的條件下丙酮酸激酶(PK)催化磷酸烯醇丙酮酸(PEP)轉(zhuǎn)化成丙酮酸，在輔酶Ⅰ還原型(NADH)存在情況下，丙酮酸被LDH轉(zhuǎn)化為乳酸，若標(biāo)記熒光于NADH上，此時有熒光的NADH變?yōu)闊o熒光的NAD。

　　參考值 正常熒光在20min內(nèi)消失。15.0±1.99IU/gHb(37℃)(ICSH推薦Blume法)

　　(2)臨床意義：PK嚴(yán)重缺乏者熒光60min不消失;PK中等缺乏者熒光25～60min消失。純合子PK值在正常活性到25%以下，雜合子為正常25%～50%。

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