2012年初級(jí)檢驗(yàn)技師生化檢驗(yàn)：蛋白酶活力測(cè)定

　　照品溶液的制備 精密稱取經(jīng) 105℃干燥至恒重的酪氨酸 適量，加鹽酸溶液〔取1mol/L鹽酸溶液65ml，加水至1，000ml 〕制成每1ml 中含0.5mg 的溶液。

　　供試品溶液的制備 取本品適量，精密稱定，用上述鹽酸溶液制成每1ml 中約含 0.2 ～0.4 的溶液。

　　測(cè)定法 取試管6 支，其中3 支各精密加入對(duì)照品溶液1ml ，另3 支各精密加入供 試品溶液1ml ，置37±0.5 ℃水浴中，保溫5 分鐘，精密加入預(yù)熱至37±0.5 ℃的血紅 蛋白試液5ml ，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在37±0.5 ℃水浴中反應(yīng)10分鐘。立即精密加入5% 三氯醋酸溶液5ml ，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。另取試管2 支，各精密 加入血紅蛋白試液5ml ，置37±0.5 ℃水浴中保濕10分鐘，再精密加入 5%三氯醋酸溶 液5ml ，其中1 支加供試品溶液1ml ，另1 支加上述鹽酸溶液1ml ，搖勻，濾過，棄去 初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對(duì)照品的空白對(duì)照，照分光光度法(附錄Ⅳ A) 在275nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，算出平均值A(chǔ)S 和A，按下式計(jì)算。

　　每g含蛋白酶活力單位數(shù)=(A×Ws×n)/(As×W×10×181.19)

　　式中

　　AS 為對(duì)照品的平均吸收度;A為供試品的平均吸收度;Ws =1ml 對(duì)照品溶液中含酪氨酸的量，μg ;W=供試品取樣量，g ;n=供試品的稀釋倍數(shù)。

　　在上述條件下，每分鐘能催化水解血紅蛋白生成1 μmol 酪氨酸的酶量，為一個(gè)蛋 白酶活力單位。

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