凝集反應(yīng)相關(guān)知識點總結(jié)_2016臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導_臨床檢驗醫(yī)學檢驗師輔導精華

　　【摘要】臨床醫(yī)學檢驗初級技師資格考試時間一般在每年的5月份。環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學考試網(wǎng)為幫助廣大考生更好的進行復習，特整理凝集反應(yīng)相關(guān)知識點總結(jié)_2016臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導_臨床檢驗醫(yī)學檢驗師輔導精華供大家參考，預祝大家順利通過2016臨床醫(yī)學初級檢驗技師考試。

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　　一、凝集反應(yīng)的特點

　　細菌和紅細胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集(agglutination)現(xiàn)象。早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。至1900年Landsteriner在特異性血凝現(xiàn)象的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人類血型，并于1930 年獲得了諾貝爾獎金。凝集試驗靈敏度高，方法簡便，迄今已成為通用的免疫學試驗，廣泛應(yīng)用于臨床檢驗。

　　凝集反應(yīng)的發(fā)生分兩階段：

　　①抗原抗體的特異結(jié)合;

　?、诔霈F(xiàn)可見的顆粒凝集。

　　通常，細菌和紅細胞等顆?？乖趹乙褐袔踟撾姾?，周圍吸引一層與之牢固結(jié)合的正離子，外面又排列一層松散的負離子層，構(gòu)成一個雙層離子云。在松散層內(nèi)界和外界之間的電位差形成Z電位。溶液中的離子強度愈大，Z電位也就愈大。Z電位使顆粒相互排斥。當特異抗體與相應(yīng)抗原顆?；パa結(jié)合時，抗體的交聯(lián)作用克服了抗原顆粒表面的Z電位，而使顆粒聚集在一起。但當抗體分子太少，不足以克服相當厚度的離子云層時，則不能使顆粒聚集。因此在凝集反應(yīng)中，IgM類抗體的作用比IgG類抗體要大數(shù)百倍，所以IgG類抗體常出現(xiàn)不完全反應(yīng)，即不可見的抗原抗體反應(yīng)。這種抗體有時又稱不完全抗體。不完全的含義是：可與抗原牢固結(jié)合，但因其分子量較小，不能起到由橋聯(lián)作用而形成的可見凝集現(xiàn)象。在試驗過程中，為促使凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)，可采取以下措施：增加蛋白質(zhì)或電解質(zhì)，降低溶液中離子強度以縮短顆粒間的距離;增加試液的粘滯度，如加入右旋糖酐或葡聚糖等;用胰酶或神經(jīng)氨酸酶處理，改變細胞的表面化學結(jié)構(gòu);以離心方法克服顆粒間的排斥等。

　　凝集試驗是一個定性的檢測方法，即根據(jù)凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)與否判定結(jié)果陽性或陰性;也可以進行半定量檢測，即將標本作一系列對倍稀釋后進行反應(yīng)，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度作為滴度。由于凝集反應(yīng)方法簡便，敏感度高，因而在臨床檢驗中被廣泛應(yīng)用。

　　在免疫學技術(shù)中，凝集反應(yīng)可分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)兩大類。自身紅細胞凝集試驗和抗球蛋白參與的凝集試驗是兩種特殊的凝集反應(yīng)。

　　二、直接凝集反應(yīng)

　　細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒抗原，在適當電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為直接凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)中的抗原稱為凝集原，抗全稱為凝集素。常用的凝集試驗有玻片法和試管法兩種。

　　(一)玻片凝集試驗

　　玻片凝集試驗為定性試驗方法，一般用已知抗體作為診斷血清、與受檢顆?？乖缇夯蚣t細胞懸液各加一滴在玻片上，混勻，數(shù)分鐘后即可用肉眼觀察凝集結(jié)果，出現(xiàn)顆粒凝集的為陽性反應(yīng)。此法簡便、快速，適用于從病人標本中分離得到的菌種的診斷或分型。玻片法還用于紅細胞ABO血型的鑒定。

　　(二)試管凝集試驗

　　試管凝集試驗為半定量試驗方法，在微生物學檢驗中常用已知細菌作為抗原液與一系列稀釋的受檢血清混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程度，通常以產(chǎn)生明顯凝集現(xiàn)象的最高稀釋度作為血清中抗體的效價，亦稱為滴度。在試驗中，由于電解質(zhì)濃度和pH不適當?shù)仍?，可引起抗原的非特異性凝集，出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，因此必須設(shè)不加抗體的稀釋液作對照組。

　　臨床上常用的直接試管凝集試驗為肥達試驗和外斐試驗。在輸血時也常用于受體和供體兩者的紅細胞和血清的交互配血試驗。

　　三、間接凝集反應(yīng)

　　(一)間接凝集反應(yīng)類型

　　根據(jù)致敏載體用的是抗原或抗體以及凝集反應(yīng)的方式，間接凝集反應(yīng)分為4類：

　?、僬蜷g接凝集反應(yīng);

　　②反向間接凝集反應(yīng);

　?、坶g接凝集抑制反應(yīng);

　　④協(xié)同凝集反應(yīng)。

　　可用作載體的顆粒很多，常用的為紅細胞、膠乳顆粒及明膠顆粒等。間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡便、無需特殊的實驗設(shè)備等特點，而且能用于抗原或抗體的測定，因此在臨床檢驗中廣為應(yīng)用。

　　間接凝集反應(yīng)是將可溶性抗原(或抗體)先吸附于適當大小的顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)抗體(或抗原)作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象。

　　(二)間接血凝試驗

　　血凝試驗(hemagglutinationtest)是紅細胞凝集試驗的簡稱。間接血凝試驗是以紅細胞作為載體的間接凝集試驗，在臨床檢驗中應(yīng)用廣泛，以下簡述其操作過程。

　　1、載體

　　紅細胞是大小均一的載體顆粒，最常用的為綿羊、家兔、雞的紅細胞及O型人紅細胞。新鮮紅細胞能吸附多糖類抗原，但吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力較差。致敏的新鮮紅細胞保存時間短，且易變脆、溶血和污染，只能使用2～3天。為此一般在致敏前先將紅細胞醛化，可長期保存而不溶血。常用的醛類有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。紅細胞經(jīng)醛化后體積略有增大，兩面突起呈圓盤狀。

　　醛化紅細胞具有較強的吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力，血凝反應(yīng)的效果基本上與新鮮紅細胞相似。如用兩種不同醛類處理效果更佳。也可先用戊二醛，再用鞣酸處理。醛化紅細胞能耐60℃加熱，并可反復凍融不破碎，在4℃可保存3～6個月，在-20℃可保存一年以上。

　　2、致敏

　　致敏用的抗原或抗體要求純度高，并保持良好的免疫活性。用蛋白質(zhì)致敏紅細胞的方法有直接法和間接法。直接法只須在低pH，低離子濃度下，用醛化紅細胞直接吸附即可。間接法則需用偶聯(lián)劑將蛋白質(zhì)結(jié)合到紅細胞上。常用偶聯(lián)劑為雙偶氮聯(lián)苯胺(bidiazotizedbenzidine，BDB)和氯化鉻。前者通過共價鍵，后者通過金屬陽離子靜電作用使蛋白質(zhì)與紅細胞表面結(jié)合而達到致敏的目的。

　　(三)膠乳凝集試驗

　　膠乳凝集試驗也是一種間接凝集試驗，所用的載體顆粒為聚苯乙烯膠乳，是一種直徑約為0.8μm大小的圓形顆粒，帶有負電荷，可物理性吸附蛋白分子，但這種結(jié)合牢固性差。也可制備成具有化學活性基團的顆粒，如帶有羧基的羧化聚苯乙烯膠乳等，抗原或抗體以共價鍵交聯(lián)在膠乳表面?；瘜W交聯(lián)一般通過縮合劑碳化二亞胺將膠乳上的羧基與被交聯(lián)物上的氨基縮合在一起。這種用交聯(lián)致敏的膠乳試劑性能穩(wěn)定，保存期長。

　　膠乳凝集試驗分試管法與玻片法。

　　試管法先將受檢標本在試管中以緩沖液作倍比稀釋，然后加入致敏的膠乳試劑，反應(yīng)后觀察膠乳凝集結(jié)果。玻片法操作簡便，一滴受檢標本和一滴致敏的膠乳試劑在玻片上混勻后，連續(xù)搖動2～3min即可觀察結(jié)果。出現(xiàn)凝集大顆粒的為陽性反應(yīng)，保持均勻乳液狀為陰性反應(yīng)。

　　膠乳為人工合成的載體，因此其性能比生物來源的紅細胞穩(wěn)定，均一性好。但膠乳與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力以及凝集性能不如紅細胞，因此作為間接凝集試驗，膠乳試驗的敏感度不及血凝試驗。

　　(四)明膠凝集試驗

　　將全病毒抗原及重組抗原吸附在粉紅色明膠顆粒上，來檢測相應(yīng)抗體。

　　間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡便、無需特殊的實驗設(shè)備等特點，而且能用于抗原或抗體的測定，因此在臨床檢驗中廣為應(yīng)用。

　　(1)抗原的檢測：反向間接凝集試驗用于檢測病原體可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質(zhì)成分。

　　(2)抗體的檢測：可用于檢測細菌、病毒和寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體，例如間接凝集試驗或明膠顆粒凝集試驗用于檢測抗人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體以診斷艾滋病、乳膠凝集試驗用于檢測抗溶血素O等。

　　(五)間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用

　　間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡便、無需特殊的實驗設(shè)備等特點，而且能用于抗原或抗體的測定，因此在臨床檢驗中廣為應(yīng)用。

　　(一)抗原的檢測

　　反向間接凝集試驗可用于檢測病原體的可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質(zhì)成分。間接凝集反應(yīng)的敏感度雖較沉淀反應(yīng)高，但低于新發(fā)展的各種標記免疫測定。因此在微量抗原測定中其實用性取決于臨床的要求。例如測定尿液HGG的膠乳凝集妊娠試驗，直接凝集法的敏感度約為300mIU/ml，凝集抑制法的敏感度約為1000mIU/ml，停經(jīng)35～40天以上的孕婦可測得陽性結(jié)果。檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的間接血凝試驗敏感度一般在2～5ng /ml，對獻血員的篩檢已不符合要求。

　　(二)抗體的檢測

　　可用于檢測細菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體，例如間接血凝試驗或明膠顆粒凝集試驗用于檢測抗人免疫缺陷病毒(HIV)抗體以診斷艾滋病、膠乳凝集試驗用于檢測抗溶血素O等。也有用于檢測自身免疫性疾病的抗體，例如類風濕因子膠乳凝集試驗、抗DNA抗體和抗甲狀腺球蛋白抗體的間接血凝試驗等。

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