2015執(zhí)業(yè)藥師考試：糖鏈的結(jié)構(gòu)測(cè)定

　　糖鏈的結(jié)構(gòu)測(cè)定是2015執(zhí)業(yè)藥師考試藥學(xué)專(zhuān)業(yè)知識(shí)一的重點(diǎn)內(nèi)容，環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)小編整理相關(guān)知識(shí)點(diǎn)如下。

　　測(cè)定糖鏈的結(jié)構(gòu)主要解決三個(gè)問(wèn)題：?jiǎn)翁堑慕M成;糖與糖的連接位置和順序;苷鍵的構(gòu)型。

　　(一)分子量的測(cè)定　苷的分子量測(cè)定目前大多采用質(zhì)譜法。但由于其極性大導(dǎo)致熱揮發(fā)性差，電子轟擊法(EI)和化學(xué)電離(CI)常不能得到理想的結(jié)果，一般采用場(chǎng)解吸(FD)、快原子轟擊(FAB)、電噴霧(ESI)等方法獲得[M+H]+、[M+Na]+等準(zhǔn)分子離子峰。

　　(二)單糖的鑒定　苷中糖鏈的研究首先要了解由哪些單糖所組成，各種單糖之間的比例如何。一般是將苷鍵全部酸水解，然后用紙色譜檢出單糖的種類(lèi)。經(jīng)顯色后用薄層掃描儀求得各種糖的分子比。單糖的定性定量也可以通過(guò)苷全甲基化并水解后得到的甲基化單糖的氣相色譜決定，但需要各種各樣的甲基化單糖作標(biāo)準(zhǔn)品。

　　(三)單糖之間連接位置的確定

　　單糖之間連接位置的確定的兩種方法是：苷全甲基化甲醇解，13CNMR苷化位移。

　　將苷全甲基化，然后水解苷鍵，鑒定所有獲得的甲基化單糖，其中游離的一OH的部位就是連接位置。水解要盡可能溫和，否則會(huì)發(fā)生去甲基化反應(yīng)和降解反應(yīng)。

　　(四)糖鏈連接順序的確定

　　早期決定糖連接順序的方法主要是緩和水解法，即用稀酸(包括有機(jī)酸)水解、酶解、乙酰解、堿水解等方法，將苷的糖鏈水解成較小的片段(各種低聚糖)，然后分析這些低聚糖的連接順序，從低聚糖的結(jié)構(gòu)推測(cè)整個(gè)糖鏈的結(jié)構(gòu)。Smith裂解法也廣泛用于糖連接順序的決定，只是分析碎片的工作比較繁瑣。

　　近年質(zhì)譜分析也已用于糖鏈連接順序的研究。在快原子轟擊質(zhì)譜(FABMS)中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)苷分子中依次脫去末端糖的碎片離子峰。如果單糖的質(zhì)量不同，可由此確定糖的連接順序。

　　目前，2D-NMR和NOE差譜技術(shù)在確定糖鏈連接位置和順序的研究中有了廣泛的應(yīng)用。如在以下化合物HMBC譜中可以觀察到1″-H和7-C，1′″-H和3″-C以及l(fā)″″-H和6″′-C的遠(yuǎn)程相關(guān)，由此可判斷糖與苷元及單糖之間的連接順序。

　　(五)苷健構(gòu)型的確定

　　糖與糖之間的苷鍵和糖與非糖部分的苷鍵，本質(zhì)上都是縮醛鍵，也都存在端基碳原子的構(gòu)型問(wèn)題。測(cè)定苷鍵構(gòu)型的問(wèn)題主要有三種方法，即酶催化水解方法、分子旋光差法(Klyne法)和NMR法。

　　1.利用酶水解進(jìn)行測(cè)定　如麥芽糖酶能水解的為α一苷鍵，而杏仁苷酶能水解的為β一苷鍵。但必須注意并非所有的β一苷鍵都能為杏仁苷酶所水解。

　　2.利用Klyne經(jīng)驗(yàn)公式進(jìn)行計(jì)算

　　Klyne根據(jù)前人的經(jīng)驗(yàn)，得出一個(gè)計(jì)算公式，即先測(cè)定未知苷鍵構(gòu)型的苷及其水解所得苷元的旋光度，再通過(guò)計(jì)算得到其分子比旋[M]D，然后用苷的分子比旋[M]D苷減去苷元的分子比旋[M]D苷元，求得其差值為△[M]D。公式如下：

　　△[M]D=[M] D苷一[M] D苷元

　　3.利用NMR進(jìn)行測(cè)定　1HNMR：葡萄糖，β-苷鍵JH1-H2=6～8Hz，α-苷鍵JH1-H2=3～4Hz。注意鼠李糖、甘露糖不能用上法鑒別。

　　13CNMR：1JC1-H1=170Hz(α-苷鍵)，1JC1-H1=160Hz(β-苷鍵)。