2015主管藥師考試輔導(dǎo)：乳糜微粒檢查試劑

　　乳糜微粒檢查試劑是主管藥師考試所涉及的內(nèi)容，環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)整理如下，供廣大主管藥師考試考生參考學(xué)習(xí)。

　　(1)免疫透射比濁法：

　?、贅悠废♂寗簆H 7.4的磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L磷酸鹽中含0.15mol/L氯化鈉)，內(nèi)含PEG-6000 40g/L及表面活性劑適量(選用聚氧乙烯月桂醚類(lèi)，如Thesit或Tween-20)，用GS玻芯漏斗抽濾后用。本試劑的吸光度A340nm<0.05，在2～6℃冰箱中可存放半年。如半年后A值仍<0.05，可繼續(xù)應(yīng)用，如>0.05可按上述條件抽濾后再用。

　?、谘蚧蛲每谷薬poAⅠ抗血清：原血清效價(jià)以1∶32～1∶64為宜?？寡蹇捎煤琍EG-6000的磷酸鹽緩沖液(不含表面活性劑)或用硫酸銨沉淀法純化?？寡鍛?yīng)用液濃度因各批抗血清的效價(jià)及免疫親和力而異(應(yīng)按試劑盒說(shuō)明書(shū)，臨用前稀釋)?？寡逯泻栏瘎?，在2～6℃冰箱中可存放半年。原血清(凍干)在低溫冰箱中(-20℃以下)可貯存數(shù)年。

　?、蹍⒖佳澹含F(xiàn)在已有國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，即WHO CM參考物質(zhì)SPI-01(凍干血清)。符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)血清由衛(wèi)生部北京老年醫(yī)學(xué)研究所提供。

　　校準(zhǔn)血清保存在-20℃以下，至少穩(wěn)定半年，化凍后必須徹底混勻后才能應(yīng)用。最好備有高、中、低濃度(例如apoAⅠ 2.0，1.3與0.6g/L左右)的校準(zhǔn)血清各1份。便于作校準(zhǔn)曲線(xiàn)。

　　附注：

　?、訇P(guān)于抗血清：比濁測(cè)定與其他方法相比對(duì)抗血清的要求更高。比濁法以用多克隆抗體為宜?？寡逯斜仨毑缓s抗體。必須十分重視從人血清中提取的apoA-Ⅰ達(dá)到免疫純、色譜純與電泳純，這不是一般實(shí)驗(yàn)室都能做到的?？寡逍r(jià)(滴度)不可低于16.目前國(guó)內(nèi)某些商品試劑中，apoA-Ⅰ抗血清效價(jià)極低，選購(gòu)試劑盒時(shí)必須注意。如果沒(méi)有在選購(gòu)前鑒定抗血清質(zhì)量的經(jīng)驗(yàn)，應(yīng)請(qǐng)有條件的單位鑒定之。

　?、谏戏ㄖ袠?biāo)本(血清)稀釋200倍是為了便于手工操作(加樣100μl)，如有精密加樣器，可作20倍稀釋(用10μl)。為了適合不同實(shí)驗(yàn)室的條件(如不同類(lèi)型的自動(dòng)化儀器)，作適當(dāng)修改時(shí)應(yīng)注意抗原抗體的比例，必須十分注意反應(yīng)體系中不可有抗原過(guò)量，線(xiàn)性上限不可低于2.5g/L.換言之，抗血清用量必須充裕，否則標(biāo)本中apoA-Ⅰ高水平時(shí)測(cè)出結(jié)果偏低。目前國(guó)內(nèi)某些商品試劑盒不但抗血清效價(jià)過(guò)低，操作中所定標(biāo)本用量又過(guò)大(如3～5μl)，抗體明顯不足，測(cè)出結(jié)果必然不準(zhǔn)確。

　?、蹫榱诉_(dá)到準(zhǔn)確測(cè)定的目的，apoA-Ⅰ與B比濁測(cè)定(終點(diǎn)法)中必須作校準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算結(jié)果。一定范圍(低標(biāo)本用量)濃度(X)與濁度(Y)基本上成直線(xiàn)關(guān)系，直線(xiàn)回歸計(jì)算出在Y軸上有一定截距(A值<0.1)，所以用單點(diǎn)校準(zhǔn)計(jì)算結(jié)果偏差較大，使測(cè)出結(jié)果不能準(zhǔn)確反映濃度的高低(高的偏低，低的偏高)。千萬(wàn)不要因?yàn)閱吸c(diǎn)法簡(jiǎn)便而忽略了測(cè)定的準(zhǔn)確性。無(wú)論用何種自動(dòng)化儀器，必須先試作校準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果在所用儀器及特定條件下反復(fù)測(cè)試，回歸線(xiàn)的截距不明顯時(shí)，才能采用單點(diǎn)校準(zhǔn)法。標(biāo)本用量在3～5μl時(shí)，即使加大抗血清用量，濃度與濁度也不成直線(xiàn)關(guān)系，只能用曲線(xiàn)直線(xiàn)化轉(zhuǎn)換后計(jì)算。

　?、苤饕蓴_因素是血清本身的混濁(如高脂血清)，用超離心或脂肪酶水解等標(biāo)本預(yù)處理方法都不實(shí)用。用表面活性劑消濁的作用也有限，所以在測(cè)定中必須作標(biāo)本空白管。除了自動(dòng)分析中可采用兩點(diǎn)法外，手工法用單一試劑而不扣除標(biāo)本空白的做法是錯(cuò)誤的。為了減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)濁度反應(yīng)的影響，必須用定值血清作校準(zhǔn)物。此外，塵埃粒子、比濁皿劃痕等干擾也必須排除。

　?、萦械纳唐吩噭┖?包括某些進(jìn)口產(chǎn)品)所附校準(zhǔn)血清定值不準(zhǔn)確，是誤差的重要來(lái)源。

　　(2)火箭電泳法：

　?、侔捅韧拙彌_液，離子強(qiáng)度0.05，pH8.6.

　　②10g/L瓊脂糖(標(biāo)準(zhǔn)電內(nèi)滲)用巴比妥緩沖液配制，加熱溶化，混合后，分裝10ml/管，冷后4℃貯存。

　?、?.15mol/L NaCl溶液。

　?、芡?或羊)抗人apoAⅠ抗血清(效價(jià)不低于1∶16)及apoB抗血清(效價(jià)不低于1∶32)。

　?、菪?zhǔn)血清(同比濁法)。

　?、奕旧海嚎捡R斯亮藍(lán)R-250 0.25g溶于甲醇45ml中，加入冰醋酸10ml及水45ml，混合，溶后備用。

　?、呙撋海好可姿?0ml及甘油100ml.