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2015主管藥師考試輔導:乳糜微粒檢查試劑

更新時間:2014-03-06 14:43:51 來源:|0 瀏覽0收藏0

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摘要 乳糜微粒檢查試劑是主管藥師考試所涉及的內(nèi)容,環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學網(wǎng)整理如下,供廣大主管藥師考試考生參考學習。

  乳糜微粒檢查試劑是主管藥師考試所涉及的內(nèi)容,環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學考試網(wǎng)整理如下,供廣大主管藥師考試考生參考學習。

  (1)免疫透射比濁法:

 ?、贅悠废♂寗簆H 7.4的磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L磷酸鹽中含0.15mol/L氯化鈉),內(nèi)含PEG-6000 40g/L及表面活性劑適量(選用聚氧乙烯月桂醚類,如Thesit或Tween-20),用GS玻芯漏斗抽濾后用。本試劑的吸光度A340nm<0.05,在2~6℃冰箱中可存放半年。如半年后A值仍<0.05,可繼續(xù)應用,如>0.05可按上述條件抽濾后再用。

 ?、谘蚧蛲每谷薬poAⅠ抗血清:原血清效價以1∶32~1∶64為宜??寡蹇捎煤琍EG-6000的磷酸鹽緩沖液(不含表面活性劑)或用硫酸銨沉淀法純化??寡鍛靡簼舛纫蚋髋寡宓男r及免疫親和力而異(應按試劑盒說明書,臨用前稀釋)。抗血清中含防腐劑,在2~6℃冰箱中可存放半年。原血清(凍干)在低溫冰箱中(-20℃以下)可貯存數(shù)年。

 ?、蹍⒖佳澹含F(xiàn)在已有國際標準,即WHO CM參考物質(zhì)SPI-01(凍干血清)。符合國際標準的校準血清由衛(wèi)生部北京老年醫(yī)學研究所提供。

  校準血清保存在-20℃以下,至少穩(wěn)定半年,化凍后必須徹底混勻后才能應用。最好備有高、中、低濃度(例如apoAⅠ 2.0,1.3與0.6g/L左右)的校準血清各1份。便于作校準曲線。

  附注:

 ?、訇P(guān)于抗血清:比濁測定與其他方法相比對抗血清的要求更高。比濁法以用多克隆抗體為宜??寡逯斜仨毑缓s抗體。必須十分重視從人血清中提取的apoA-Ⅰ達到免疫純、色譜純與電泳純,這不是一般實驗室都能做到的。抗血清效價(滴度)不可低于16.目前國內(nèi)某些商品試劑中,apoA-Ⅰ抗血清效價極低,選購試劑盒時必須注意。如果沒有在選購前鑒定抗血清質(zhì)量的經(jīng)驗,應請有條件的單位鑒定之。

  ②上法中標本(血清)稀釋200倍是為了便于手工操作(加樣100μl),如有精密加樣器,可作20倍稀釋(用10μl)。為了適合不同實驗室的條件(如不同類型的自動化儀器),作適當修改時應注意抗原抗體的比例,必須十分注意反應體系中不可有抗原過量,線性上限不可低于2.5g/L.換言之,抗血清用量必須充裕,否則標本中apoA-Ⅰ高水平時測出結(jié)果偏低。目前國內(nèi)某些商品試劑盒不但抗血清效價過低,操作中所定標本用量又過大(如3~5μl),抗體明顯不足,測出結(jié)果必然不準確。

  ③為了達到準確測定的目的,apoA-Ⅰ與B比濁測定(終點法)中必須作校準曲線計算結(jié)果。一定范圍(低標本用量)濃度(X)與濁度(Y)基本上成直線關(guān)系,直線回歸計算出在Y軸上有一定截距(A值<0.1),所以用單點校準計算結(jié)果偏差較大,使測出結(jié)果不能準確反映濃度的高低(高的偏低,低的偏高)。千萬不要因為單點法簡便而忽略了測定的準確性。無論用何種自動化儀器,必須先試作校準曲線。如果在所用儀器及特定條件下反復測試,回歸線的截距不明顯時,才能采用單點校準法。標本用量在3~5μl時,即使加大抗血清用量,濃度與濁度也不成直線關(guān)系,只能用曲線直線化轉(zhuǎn)換后計算。

 ?、苤饕蓴_因素是血清本身的混濁(如高脂血清),用超離心或脂肪酶水解等標本預處理方法都不實用。用表面活性劑消濁的作用也有限,所以在測定中必須作標本空白管。除了自動分析中可采用兩點法外,手工法用單一試劑而不扣除標本空白的做法是錯誤的。為了減少基質(zhì)效應對濁度反應的影響,必須用定值血清作校準物。此外,塵埃粒子、比濁皿劃痕等干擾也必須排除。

  ⑤有的商品試劑盒(包括某些進口產(chǎn)品)所附校準血清定值不準確,是誤差的重要來源。

  (2)火箭電泳法:

 ?、侔捅韧拙彌_液,離子強度0.05,pH8.6.

 ?、?0g/L瓊脂糖(標準電內(nèi)滲)用巴比妥緩沖液配制,加熱溶化,混合后,分裝10ml/管,冷后4℃貯存。

 ?、?.15mol/L NaCl溶液。

 ?、芡?或羊)抗人apoAⅠ抗血清(效價不低于1∶16)及apoB抗血清(效價不低于1∶32)。

 ?、菪恃?同比濁法)。

 ?、奕旧海嚎捡R斯亮藍R-250 0.25g溶于甲醇45ml中,加入冰醋酸10ml及水45ml,混合,溶后備用。

 ?、呙撋海好可姿?0ml及甘油100ml.

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