2010年生物化學(xué)備考資料：基因工程基本原理

　　基因工程基本原理：一個完整的基因克隆過程應(yīng)包括：目的基因的獲取，克隆基因載體的選擇與改造，目的基因與載體的連接，重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，篩選出含感興趣基因的重組DNA轉(zhuǎn)化細(xì)胞。實現(xiàn)上述過程需要一些重要的工具酶，如限制性內(nèi)切核酸酶連接酶等。限制性內(nèi)切核酸酶是一類識別DNA特意序列的內(nèi)切核酸酶。

　?、倌康幕虻墨@取：外源基因又稱目的基因，來源于幾種途徑：化學(xué)合成、酶促合成cDNA，制備的基因組DNA及PCR技術(shù)。細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體和一些病毒DNA均可被改造成基因克隆的載體。

　?、诨蜉d體的選擇與構(gòu)建：可作為基因載體的DNA分子有質(zhì)粒DNA、噬菌體DNA和病毒DNA，它們經(jīng)適當(dāng)改造后仍具有自我復(fù)制能力，或兼有表達(dá)外源基因的能力。

　?、弁庠椿蚺c載體的連接：連接方式有：黏性末端連接、平端連接和人工接頭連接等。

　?、苤亟MDNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞：外源DNA與載體在體外連接成重組DNA分子，需將其導(dǎo)入宿主細(xì)胞。隨受體細(xì)胞生長、增殖，重組DNA分子得以復(fù)制、擴(kuò)增。

　　⑤重組體的篩選：鑒定哪一菌落或嗜菌斑所含重組DNA分子確實帶有目的基因，即可得到目的基因的克隆，這一過程即為篩選或選擇。

　?、蘅寺』虻谋磉_(dá)：在原核或真核表達(dá)體系中進(jìn)行表達(dá)，獲得所需要的蛋白質(zhì)。

　　例題(單選)：在分子生物學(xué)領(lǐng)域中，分子克隆主要是指：

　　A.DNA的大量復(fù)制 B.DNA的大量剪切 C.RNA的大量復(fù)制 D.RNA的大量剪切 E.反轉(zhuǎn)錄酶

　　答案：A

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