初級檢驗技師考試輔導：熒光抗體技術

　　初級檢驗技師考試輔導：熒光抗體技術

　　熒光抗體技術

　　(1)熒光抗體的制備和鑒定

　?、倏贵w熒光素標記：用于標記抗體，要求是高特異性和高親和力的。作為標記的熒光素應符合以下要求：

　　1)應具有能與蛋白質分子形成共價鍵的化學基團，與蛋白質結合后不易解離，而未結合的色素及其降解產物易于清除。2)熒光效率高，與蛋白質結合后，仍能保持較高的熒光效率。3)熒光色澤與背景組織的色澤對比鮮明。4)與蛋白質結合后不影響蛋白質原有的生化與免疫性質。5)標記方法簡單、安全無毒。6)與蛋白質的結合穩(wěn)定，易于保存。常用的標記蛋白質的方法有攪拌法和透析法兩種。

　　②熒光抗體的鑒定：包括效價及熒光素與蛋白質的結合比率。抗體效價可以用瓊脂雙擴散法進行滴定，效價大于1：16者較為理想。熒光素與蛋白質結合比率(F/P)來計算。F/P值越高，說明抗體分子上結合的熒光素越多，反之則越少。一般用于固定標本的熒光抗體以F/P=1.5為宜，用于活細胞染色的以F/P=2.4為宜。

　　(2)免疫熒光顯微技術：是使熒光抗體與標本切片中組織或細胞表面的抗原進行反應，洗滌除去游離的熒光抗體后，于熒光顯微鏡下觀察，在黑暗背景上可見明亮的特異熒光。

　　①標本的制作：主要靠觀察切片標本上熒光抗體的染色結果作為抗原的鑒定和定位。

　　②熒光抗體染色：滴加經適當稀釋的熒光抗體進行染色。

　　③熒光顯微鏡檢查：最好在染色當天即作鏡檢，以防熒光消退，影響結果。

　　④實驗的類型：包括直接法、間接法、補體結合法和雙標記法。

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