初級檢驗技師輔導(dǎo)：酶免疫技術(shù)的特點

更新時間：2010-11-29 13:39:01 來源：|0

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　　初級檢驗技師輔導(dǎo)：酶免疫技術(shù)的特點

　　酶免疫技術(shù)的特點

　　酶免疫技術(shù)是利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用，提高特異性抗原-抗體免疫學反應(yīng)檢測敏感性的一種標記免疫技術(shù)。

　　(1)酶和酶作用的底物

　　①辣根過氧化酶(HRP)：是一種糖蛋白，含糖量約18%;分子量為44kD;是一種復(fù)合酶，由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結(jié)合而成的一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶為無色糖蛋白，在275nm波長處有最高吸收峰;輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán)，在403nm波長處有最高吸收峰。在反應(yīng)中H2O2是受氫體底物，DH2無色的供氫體底物，在HRP的催化下脫氫而顯色，此即HRP作為示蹤物的原理。

　　②堿性磷酸酶(AP)：是從牛腸粘膜或大腸桿菌中提取。從大腸桿菌提取的最適pH為8.0;用小牛腸粘膜提取的AP最適pH為9.6。

　?、燮渌拿福河衅咸烟茄趸浮?beta;-半乳糖苷酶和脲酶等。

　　(2)酶標記的抗體或抗原：稱為結(jié)合物。制備方法通常有戊二醛交聯(lián)法(包括有一步法和二步法)和過碘酸鹽氧化法。標記抗體的最佳用量：通常采用棋盤滴定法進行滴定。

　　(3)固相載體

　　主要試劑：固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和與標記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物?？勺鞴滔噍d體物質(zhì)最常用的是聚苯乙烯。與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。聚苯乙烯作為ELISA固相載體，載體還包括微孔濾膜和含鐵磁性微粒。聚氯乙烯板的特點為質(zhì)軟板薄，可切割，價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時也略高。

　　(4)免疫吸附劑：固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。如在包被后再用l%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除這種干擾。這一過程稱為封閉。包被好的ELISA板在低溫可放置一段時間而不失去其免疫活性。