2013年初級(jí)檢驗(yàn)技士考試：血液細(xì)胞染色

    點(diǎn)擊進(jìn)入：臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)第一章：血液樣本采集和血涂片制作（此篇匯總）

　　(一)瑞氏(Wright’s)染色法：為觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識(shí)別各種細(xì)胞及其異常變化，血涂片必須進(jìn)行染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變來的。目前常用瑞氏染色法。

　　(1)瑞特染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)組成的復(fù)合染料。亞甲藍(lán)為四甲基硫堇染料，有對(duì)醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)。美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級(jí)染料。市售美藍(lán)中部分已被氧化為天青。伊紅通常為鈉鹽。伊紅和美藍(lán)混合后，產(chǎn)生一種憎液性膠體伊紅美藍(lán)中性沉淀，即瑞氏染料。

　　(2)細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對(duì)各種染料的親和力也不一樣。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì);細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。

　　(3)PH對(duì)細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均為蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對(duì)氫離子濃度十分敏感，染色用玻片必須清潔，無酸堿污染。配制瑞特液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常，以致識(shí)別困難，甚至造成錯(cuò)誤。

　　新鮮配制的染料偏堿，須在室溫或是37℃下貯存一定時(shí)間，待染料成熟，主要是美藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆后才能使用，貯存時(shí)愈久，染色效果愈好。EAM GILLILAND等采用吸光度比值作為瑞特染液的質(zhì)量規(guī)格。rA測定方法如下：取瑞特染液15-25μl(視染液濃度而定)，加甲醇10ml稀釋，混勻后以甲醇為空白管，分別以波長650nm和25nm比色。Ra=a650/a525.因?yàn)槊浪{(lán)吸收峰波長為650nm，伊紅吸收峰波長為525nm;天青B吸收峰也為650nm但吸光度A約為美藍(lán)的一半。所以新配染料rA接近2，隨著美藍(lán)逐漸氧化為天青B，RA也相應(yīng)下降。RA下降到1.3±0.1時(shí)即可使用。瑞特染液貯存過程中，必須塞嚴(yán)，以防止甲醇揮發(fā)和被氧化成甲酸。有人主張?jiān)谂浞街屑尤敫视?0ml，防止甲醇揮發(fā)，可使細(xì)胞染色清晰。甲醇必須純凈，如甲醇中丙酮含量過多，染色偏酸，使白細(xì)胞著色不良。

　　(二)吉姆薩(Giemsa)染色法：吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。但本法對(duì)細(xì)胞核和寄生蟲著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更清晰，而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長，可用復(fù)合染色法。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞特染色法染10min?；蛳扔萌鹛厝旧ㄈ旧螅儆孟♂尲匪_復(fù)染。

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