2015主管檢驗技師免疫檢驗：B細(xì)胞功能的檢測

　　B細(xì)胞功能的檢測是醫(yī)學(xué)檢驗主管技師考試的重點，環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)小編將相關(guān)知識點整理如下，希望對廣大考生有所幫助。

　　一、體內(nèi)試驗

　　B細(xì)胞受抗原或促有絲分裂原刺激后，可行分裂增殖并分化成熟為抗體生成細(xì)胞，且分泌相應(yīng)的Ig。B細(xì)胞功能減低或缺陷，可表現(xiàn)為體內(nèi)Ig和血型抗體量下降或缺如，患者對外源性抗原的應(yīng)答能力減弱或缺如，僅產(chǎn)生極低或不能產(chǎn)生特異性抗體，故臨床定量測定受檢者血清中各種Ig量和相應(yīng)血型抗體，可判斷B細(xì)胞功能，也是診斷體液免疫缺陷的指標(biāo)。反之，如血清中一種或多種Ig或輕、重鏈片段異常增高，表明B細(xì)胞產(chǎn)生Ig的功能異常增高。此外給患者注射適量常用的抗原，如白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素等蛋白質(zhì)抗原，或肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等多糖抗原，經(jīng)一定誘導(dǎo)期后，用適當(dāng)?shù)姆椒y定受檢者血清中相應(yīng)抗體的效價，根據(jù)抗體的水平也可判斷受檢者體內(nèi)B細(xì)胞的功能。實驗室常用如下的體外試驗檢測B細(xì)胞功能。

　　二、B細(xì)胞早期活性指標(biāo)的測定

　　B細(xì)胞經(jīng)不同抗原激發(fā)即開始分化增殖，初期表現(xiàn)為體積增大，可用儀器加以檢測。激活的B細(xì)胞表面MHCⅡ類抗原的表達(dá)增多，可用相應(yīng)的單克隆抗體通過熒光免疫或ABC法檢測。

　　三、溶血空斑形成試驗

　　經(jīng)典的溶血斑試驗用于檢測實驗動物抗體形成細(xì)胞的功能，其原理是將綿羊紅細(xì)胞(SRBC)免疫小鼠，4天后取出脾細(xì)胞，加入SRBC及補(bǔ)體，混合在溫?zé)岬沫傊芤褐?，澆在平皿?nèi)或玻片上，使成一蒲層，置37溫育。由于脾細(xì)胞內(nèi)的抗體生成細(xì)胞可釋放抗SRBC抗體，使其周圍的SRBC致敏，在補(bǔ)體參與下導(dǎo)致SRBC溶血，形成一個肉眼可見的圓形透明溶血區(qū)而成為溶血空斑(plaque)。每一個空斑表示一個抗體形成細(xì)胞，空斑大小表示抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的多少。這種直接法所測至的細(xì)胞為IgM生成細(xì)胞，其它類型Ig由于溶血效應(yīng)較低，不能直接檢測，可用間接檢測法，即在小鼠脾細(xì)胞和SRBC混合時，再加抗鼠Ig抗體(如兔抗鼠Ig)，使抗體生成細(xì)胞所產(chǎn)生的IgG或IgA與抗Ig抗體結(jié)合成復(fù)合物，此時能活化補(bǔ)體導(dǎo)致溶血，稱間接空斑試驗。

　　但是上述直接和間接空斑形成試驗都只能檢測抗紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生細(xì)胞，而且需要事先免疫，難以檢測人類的抗體產(chǎn)生情況。如果用一定方法將SRBC用其它抗原包被，則可檢查與該抗原相應(yīng)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，這種非紅細(xì)胞抗體溶血空斑試驗稱為空斑形成試驗，它的應(yīng)用范圍較大。

　　現(xiàn)在常用的為SPA-SRBC溶血空斑試驗。SPA能與人及多數(shù)哺乳動物IgG的Fc段呈非特異性結(jié)合，利用這一特征，首先將SPA包被SRBC，然后進(jìn)行溶血空斑測定，可提高敏感度和應(yīng)用范圍。在該測試系統(tǒng)中，加入抗人Ig抗體，可與受檢細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，復(fù)合物上的Fc段可與連接在SRBC上的SPA結(jié)合，同時激活補(bǔ)體，使SRBC溶解形成空斑。此法可用于檢測人類外周血中的IgG產(chǎn)生細(xì)胞，與抗體的特異性無關(guān)。用抗IgA、IgG或IgM抗體包被SRBC，可測定相應(yīng)免疫球蛋白的產(chǎn)生細(xì)胞，這種試驗稱為反相空斑形成試驗。

　　溶血空斑形成試驗可用于測定藥物和手術(shù)等因素對體液免疫功能的影響，或評價免疫治療或免疫重建后機(jī)體產(chǎn)生抗體的功能。

　　四、B細(xì)胞增殖能力的試驗

　　(一)不同刺激物誘發(fā)增殖試驗

　　抗IgM抗體和細(xì)菌脂多糖均能刺激B細(xì)胞增殖，培養(yǎng)1～3天以后，加3H-TdR，與淋巴細(xì)胞增殖試驗一樣，檢測細(xì)胞內(nèi)cpm，計算促有絲分裂原對淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)。也可用臺盼藍(lán)法計細(xì)胞增殖或用DNA特異性染色觀察胞內(nèi)DNA或RNA的分化程度。

　　(二)葡萄球菌誘導(dǎo)試驗

　　葡萄球菌CowenⅠ株(SAC)表面富含SPA。該試驗不依賴T細(xì)胞的參與，操作原則是將SAC與淋巴細(xì)胞按一定比例混合，按增殖試驗法同樣操作和計數(shù)cmp值。葡萄球菌表面SPA含量與激發(fā)B細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力成正比。

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