2014初級(jí)檢驗(yàn)技士考試:免疫金的制備
免疫金的制備是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技士考試所涉及的內(nèi)容,環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)整理如下,供廣大醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技士考試考生參考學(xué)習(xí)。
1.用0.2mol/LK2CO3或0.1mol/LHC1調(diào)節(jié)膠體金溶液的pH至選定值。原則上可選擇待標(biāo)記蛋白質(zhì)等電點(diǎn),也可略為偏堿。但通常最適反應(yīng)pH往往需經(jīng)多次試驗(yàn)才能確定。
在調(diào)節(jié)膠體金的pH值時(shí)應(yīng)注意,膠體金會(huì)阻塞pH計(jì)的電極,不可直接將電極插入膠體金溶液中,宜先用終濃度為0.15的聚乙二醇(PEG,20000)穩(wěn)定膠體金后,再膠體金的pH值。
2.將1/10體積的合適濃度的蛋白質(zhì)溶液加于膠體金溶液中,放置室溫反應(yīng)2~5min。
由于鹽類(lèi)成分能影響膠體金對(duì)蛋白質(zhì)的吸附,并可使膠體金聚沉,因此待標(biāo)記蛋白質(zhì)溶液若含有較高的離子濃度,應(yīng)在標(biāo)記前先對(duì)低離子強(qiáng)度的蒸餾水透析去鹽。
3.加入濃度為0.2%的PEG或BSA以飽和游離的膠體金。
4.離心分離,去除上清液中未結(jié)合的蛋白質(zhì)。離心條件視膠體金顆粒的粒徑而異:對(duì)5nm金顆??蛇x用40000r/min離心1h;8nm金顆粒用25000r/min離心45min;14nm金顆粒用25000r/min離心30min,40nm金顆粒用15000r/min離心30min.
5.輕吸上清液。沉淀用含PEG或BSA的緩沖液懸浮,恢復(fù)原體積后再離心。如此洗滌2~4次。以徹底除去未結(jié)合的蛋白質(zhì)。
6.免疫金復(fù)合物最終用稀釋液配制成工作濃度保存。稀釋液通常是加入穩(wěn)定劑的緩沖液。緩沖溶液常用中性的PBS或Tris緩沖液。
多種蛋白質(zhì)、葡聚糖、PEG2000、明膠等均為良好的高分子穩(wěn)定劑,PEG和BSA是最常用的穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑有兩大作用:一為保護(hù)膠體金的穩(wěn)定性,使之便于長(zhǎng)期保存;二為防止或減少免疫金復(fù)合物的非特異性吸附反應(yīng)。穩(wěn)定劑的合理選擇是十分重要的,不適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑有時(shí)也會(huì)導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。 分子量及蛋白質(zhì)濃度等也會(huì)影響蛋白質(zhì)的吸附。
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