2014年臨床助理醫(yī)師醫(yī)學微生物學復習資料：病毒感染的檢查方法

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　　一、標本的采集與送檢(principle of collection specimen)

　　1、采集急性期標本

　　2 、污染標本應用抗生素抑制標本中細菌或真菌的生長

　　3 、低溫保存，快速送檢

　　4、 血清學實驗檢查抗體(雙分血清)

　　二、病毒的分離培養(yǎng)與鑒定

　　(一)病毒的分離培養(yǎng)

　　• 動物接種 選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況

　　• 雞胚培養(yǎng) 不同病毒選擇不同接種部位(絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊)，分離流感病毒最常用。

　　• 細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法

　　(1)原代細胞―來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。

　　(2)二倍體細胞―在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。

　　(3)傳代細胞―能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。

　　病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標：

　　• 細胞病變效應(CPE)：即某些病毒在細胞內(nèi)增殖引起的特有的細胞病變(細胞變圓、聚集、壞死、脫落等)

　　• 紅細胞吸附

　　• 干擾現(xiàn)象

　　• 細胞代謝改變(pH)

　　(二)病毒的鑒定

　　核酸類型、理化性狀、形態(tài)、血清學鑒定、基因測序和生物對比。

　　(三)病毒的數(shù)量與感染性測定

　　1.50%組織細胞感染量

　　2.紅細胞凝集試驗

　　3.空斑形成試驗

　　三、病毒的血清學診斷

　　用已知病毒抗原檢測病人血清中相應抗體以診斷病毒性疾病(中和實驗、補體結合實驗、血凝抑制實驗、凝膠免疫擴散等)。

　　四、病毒的快速診斷

　　(一) 形態(tài)學

　　電鏡和免疫電鏡――直接觀察病毒

　　光鏡―― 大病毒 和包涵體

　　(二)檢測病毒蛋白抗原

　　用已知特異性抗體直接檢測病毒蛋白抗原(簡便、敏感、特異)

　　常用方法：免疫熒光技術(IF)

　　固相放射免疫測定(SPRIT)

　　酶免疫技術(EIA)等。

　　(三) 檢測病毒特異性IgM抗體

　　檢測病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染或證明病毒復制。

　　(四)檢測病毒的核酸

　　1 核酸雜交

　　? 斑點雜交(dot hybridization)

　　? 原位雜交(in site hybridization)

　　? DNA印跡雜交(Southern blot)

　　? RNA印跡雜交 (northern blot)

　　2 核酸擴增

　　? 聚合酶鏈反應 (polymerase chain reaction，PCR DNA)

　　? 連接酶鏈反應(ligase chain reaction，LCR)

　　? 反轉錄PCR(Reverse transcrptase PCR，RT―PCR (RNA)

　　3 基因芯片技術(gene chip)

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